Цель исследования — изучение активности и свойств нуклеозиддифосфатазы (НДФаза) у цестод Bothriocephalus scorpii. Материалы и методы. Цестод гомогенизировали с 10 объемами среды выделения. НАДазы определяли в митохондриях и микросомах с субстратами (ИДФ, ГДФ, УДФ). Неорганический фосфор определяли по Кочетову (1980). Было испытано действие 10 антигельминтных препаратов на активность НДФазы. Результаты и обсуждение. Обнаружили, что митохондриальные и микросомальные фракции цестод B.scorpii обладают нуклеозиддифосфатазной активностью. Активность фермента зависит от субстратов и ионов Mg2+. Изучено влияние различных эффекторов и ионов (Са2+, Mn2+, Zn2+) на энзимную активность. Эффект 10 антгельминтных препаратов на активность НДФазы был изучен. Эффективными препаратами являются битионол и трихлорофен.
нуклеозиддифосфатаза, инозиндифосфат, гуанозиндифосфат, уридиндифосфат, цестода, митохондрия, микросомы, антигельминтики.
Введение
Адаптация гельминтов к паразитизму оказала влияние на их энергетический баланс; изменилось соотношение затрат энергии на различные жизненные функции. Установлено, что пути углеводного и энергетического обменов гельминтов значительно богаче и разнообразнее, чем у позвоночных животных и могут протекать как по анаэробной, так и по аэробной схеме обмена.
Нуклеозиддифосфатаза (НДФаза) катализирует гидролиз нуклеозиддифосфатов, отщепляя концевой фосфат. Каталитические свойства фермента (рН-оптимум, субстратная и ингибиторная специфичность) существенно зависят как от источника фермента, так и от условий определения ферментативной активности. НДФазы у беспозвоночных были определены с помощью гистохимических [7–9], цитохимических [3, 10, 11] и биохимических методов исследования [4, 5, 12]. У нематод НДФазы были обнаружены в стенке кишечного тракта [5, 11], у трематод — в тегументе, различных тканях [3, 10], у цестод — в тегументе, паренхиме, репродуктивных органах, сколексе, церкомере [7, 9]. У речного рака Orconectes limosus фермент изучали в эпителии жабер [12], а у кровососущих Cimex lectularius и Phlebotomus papatase [4] — в эндоплазматическом ретикулуме. Так как беспозвоночные обладают крайне разнообразными путями обмена, каждый вид необходимо исследовать как уникальный случай.
1. Корниш-Боуден Э. Основы ферментативной кинетики. - М.: Мир, 1979.
2. Кочетов Г.А. Метод определения неорганического фосфора. Практическое руководство по энзимологии. - М., 1980. - С. 215-216.
3. Bogitsh B.J., Krupa P.L. Schistosoma mansoni and Haematoloechus medioplexus: nucleosidediphosphatase location in tegument. Exptl. Parasitol., 1971, Vol. 30, No 3, pp. 418-425.
4. Failer B.U., Braun N., Zimmermann H. Cloning, expression and functional characterization of a Ca2+-dependent endoplasmic reticulum nucleoside diphosphatase. J. Biol. Chem., 2002, Vol. 277, pp. 36978-36986.
5. Gounaris K., Selkirk M.E., Sadeghi S.J. A nucleotidase with unique catalytic properties is secreted by Trichinella spiralis. Mol. Biochem. Parasitol., 2004, Vol. 136, No 2, pp. 257-264.
6. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J. Biol. Chem., 1951, Vol. 193, No 1, pp. 265-275.
7. Moczon T. Histochemical studies on the enzymes of Hymenolepis diminuta. II Nonspecific and specific phosphatases in oncospheres and cysticercoids. Acta Parasitol. Pol., 1973, Vol. 21, No 1-10, pp. 99-106.
8. Moczon T. Histochemical studies on the enzymes of Hymenolepis diminuta. IV. Nonspecific phosphatases in a mature parasite. Acta Parasitol. Pol., 1974, Vol. 22, No 22-34, pp. 323-329.
9. Roy T.K. Histochemical studies on Raillietina (Raillietina) johri (Cestoda: Davaineidae). II. Nucleoside diphosphatase and thiamine pyrophosphatase. J. Helminthol., 1979, Vol. 53, No 3, pp. 261-263.
10. Roy T.K. Distribution, functional significance of phosphatase in the bovine amphistome Ceylonocotyle scoliocoelium. Ind. J. Exp. Biol., 1980, Vol. 18, No 4, pp. 385-392.
11. Seniuta R. Cytochemical studies on some specific phosphatase activities in experimental trichinellosis of mice. Wiadon. Parasitol., 1975, Vol. 21, No 4-5, pp. 683-688.
12. Strauss O., Graszynski K. Isolation of plasma membrane vesicles from the gill epithelium of the crayfish Orconectes limosus Rafinesque and properties of the Na+/H+ enchanger. Comp. Biochem. Physiol., 1992, Vol. 102A, No 3, pp. 519-526.
