Введение. С каждым годом растет интерес к изучению биологического разнообразия семейства Vitaceae Juss. Появляются новые данные о пополняющемся генетическом фонде как культурного винограда Vitis vinifera L., так и его дикорастущих форм [1, 2].У рода Виноград (Vitis L.) насчитывается порядка семидесяти видов растений, произрастающих в условиях умеренного климата в Северном полушарии [3]. Так называемый лесной виноград (Vitis sylvestris) и его формы представляют собой лианы, чаще всего как одиноко растущие растения или популяции [4].Согласно систематике, на основании разнообразия морфологических особенностей его подразделяют на несколько подвидов [5, 6]. Аборигенные и дикорастущие формы винограда различного эколого-географического происхождения – ценный селекционно-генетический материал. Комплексные исследования (в том числе молекулярно-генетические) позволяют в полной мере разобраться в вопросе происхождения винограда и выявления наиболее сходных или сильно расхожих его генотипов. В литературе есть информация по происхождению крымских, дагестанских, донских и иных аборигенных видов винограда [6, 7, 8]. При этом кубанские дикоросы и автохтоны слабо изучены. Между тем ареал их распространения довольно широк. Дикорастущий виноград, как это научно доказано, обладает повышенной устойчивостью к морозу, засухе, засолению почв, вредителям и болезням, что важно для селекции виноградной культуры [9, 10].Один из первых этапов при определении перспективных для селекционного процесса форм – оценка на устойчивость к экономически важным патогенам. Ранее в ходе морфо-биологического изучения популяций диких форм винограда, произрастающих на территории заповедника Утриш, симптомов поражения фитопатогенами не наблюдали [11].На сегодняшний день, как в России, так и в мире в целом, наблюдаются тенденции экологизации винодельческой отрасли, преобладания методов селекции вместо химических методов борьбы с различными фитопатогенными организмами [12]. Для создания нового сорта винограда необходимо провести колоссальнейшую работу. При этом важно использовать источники устойчивости к различным изменениям климата, фитопатогенам и вредителям. Такими источниками могут служить, как генотипы культивируемого винограда, так и его дикорастущие формы.В силу малоизученности дикорастущего винограда и его ценных качеств, проводятся исследования дикоросов Кубани на лесной территории заповедника «Утриш», в частности, в урочище Широкая щель Навагирского хребта [13].Цель исследований – выявление источников устойчивости к биотическим и абиотическим стресс-факторам для пополнения генофонда винограда и вовлечения их в селекционный процесс.Условия, материалы и методы. Учет и оценку морфо-биологических признаков дикорастущего винограда проводили в полевых условиях в 2020–2021 гг.Природный заповедник «Утриш» расположен в зоне средиземноморского климата с воздействием умеренного [14]. В январе средняя тем-ра – 2,5℃, в июле – 23,4℃. Среднегодовая температура – 12,0℃. Среднегодовая сумма осадков – 570-700 мм.Метеоусловия 2020 г. были нестабильными. Наблюдали резкие скачки температурного режима в зимне-весенние месяцы и неравномерное выпадение осадков, синхронно влекущих за собой относительную влажность воздуха, в весенне-летние. Годовая среднесуточная температура воздуха составила 13,8 °С, в период активной вегетации (с мая по сентябрь) она была равна 21,5 °С, максимальная достигала 32,2 °С. Общая сумма осадков за вегетационный период – 192,8 мм. Наиболее холодный зимний месяц – январь, температура в третьей декаде месяца составляла 2,4 °С. Сумма положительных температур за февраль была равна 15,2 °С, что на 3,7 °С больше января. Весенний период отличился возвратными заморозками до -6,5 °С во второй декаде марта и до -8 °С во второй декаде апреле. В начале цветения винограда (начало июня) наблюдалось выпадение осадков в норме (11,9 мм). При созревании урожая была засуха (всего 2,0 мм осадков в июле и августе. Температура среднесуточная в этот период составляла 24,5℃, влажность – 54% (что ниже нормы для нормального созревания ягод). Сумма активных температур за вегетационный период составила 3839,5 °С.Метеорологические условия 2021 г. характеризовались нестабильной погодой с частыми аномальными явлениями в форме низкотемпературных и водных стрессов, повышенной инсоляции и дефицита атмосферных осадков. По данным метеостанции района исследований среднегодовая температура воздуха составила 13,8 ºС, в период интенсивной вегетации (май–сентябрь) – 20,5 ºС. Сумма активных температур – 3323,6 ºС. Самый теплый месяц – июль (25,4 ºС), самый холодный – февраль (3,0 ºС), при этом критически низкой температурой характеризовался январь – -15,1 ºС мороза. Абсолютный максимум температуры воздуха 35,7 ºС отмечали в июле и августе. Среднегодовое количество атмосферных осадков составило 745 мм, из которых 203,4 мм выпало за 2 декаду августа, всего за период активного роста (май–сентябрь) – 558,4 мм. Среднее значение ГТК за вегетационный период 2021 г. составил 1,05.При проведении исследований применяли следующие методы:маршрутно-рекогносцировочный (территория парка условно разделена на маршруты, при прохождении которых составляли флористические описания; геоботанический [15] (описание рельефа, структура фитоценоза, а также подробная характеристика растительности по определенной геоботанической форме;морфометрический (оценивали морфометрические показатели вегетативной и генеративной части дикорастущих форм с использованием ампелографических описаний) [16].Пробы для дальнейшей идентификации фитопатогенов (живые части растений – листья, верхушки молодых побегов) отбирали в июне в фазе роста побегов после цветения со внешне здоровых растений в количестве 300…500 г зеленой массы в трехкратной повторности. Для определения наличия патогенных бактерий фрагменты листьев и лозы поверхностно стерилизовали в растворе перманганата калия в течение 30 с, промывали стерильной дистиллированной водой и помещали в микроцентрифужные пробирки объемом 1,5…2,0 мл с добавлением 500 мкл стерильной воды. После стерилизации препаровальной иглой наносили повреждения, нарушая целостность ткани. Суспензию оставляли на 40…60 минут в ламинаром боксе, после чего шпателем высевали по 50 мкл на диагностическую среду King B [17]. Высеянные бактерии инкубировали в течение 24…48 ч в термостате при температуре 28 °С.Определение 7 экономически значимых вирусных патогенов винограда (GPGV, GFkV, GLRaV-1, GLRaV-2, GLRaV-3, GVA, GFLV) проводили с методом ОТ-ПЦР [12]. Тотальную РНК из фрагментов листьев и лозы выделяли по методике с использованием частиц кремния [17, 18, 19]. Качество выделения РНК проверяли путем электрофоретического анализа в 1 %-ном агарозном геле. Для синтеза кДНК использовали 2 мкл выделенной РНК со случайными гексамерами в качестве праймера и обратную транскриптазу RevertAid H Minus в соответствии с протоколом производителя (Thermo Fisher Scientific). Далее 1 мкл кДНК использовали в качестве матрицы для ПЦР в реакционной смеси, содержащей также буфер для Taq полимеразы, 0,2 мМ dNTP, 1 мкМ прямого и обратного праймеров, специфичных к последовательности геномов детектируемых вирусов [19, 20], 2,5 мМ MgCl2, 0,375 ед. Taq полимеразы. В качестве контроля использовали образцы кДНК, в которых ранее были обнаружены изучаемые вирусы. ПЦР-продукты визуализировали путем электрофореза в 1 %-ном агарозном геле с маркером длин ДНК «100+ bp DNA Ladder» (каталожный номер NL002, ЗАО Евроген). Положительным результатом считали наличие ПЦР-продукта ожидаемого размера.Результаты и обсуждение. В 2020–2021 г. обнаружены новые места произрастания дикоросов винограда на территории государственного заповедника «Утриш», а именно, в урочище Широкая щель. Рельеф – низкогорный с высотой над уровнем моря 50-70 м. Почвы карбонатные коричневые каменистые. Растительный пояс – мезофильные широколиственные леса с преобладанием Quercus pubescens Willd., Fraxinus excelsior L., Carpinus orientalis Mill., Juniperus foetidissima Willd. и др.В урочище обнаружено и исследовано 5 экземпляров дикорастущего винограда, произрастающих один от другого на расстоянии 600…1200 м вдоль лесного ручья. Листья у них 5-и лопастные (редко встречаются 3-х), с ярко выраженными лопастями, глубокими вырезками и опушением.За 2020–2021 гг. исследовано порядка сорока морфо-признаков дикорастущих форм винограда. В среднем за два года среди растений винограда из урочища Широкая щель отмечена различия в основном по форме листа и глубине верхних боковых вырезок листа. Вариаций по годам не наблюдали (табл. 1).Таблица 1 – Морфологические особенности дикорастущих форм винограда (среднее за 2020–2021 гг.)ПризнакНомер популяции Ш1Ш2Ш3Ш4Ш5Форма верхушки молодого побегаслегка открытаяоткрытая наполовинуслегка открытаяоткрытая наполовинуслегка открытаяПаутинистое опушение верхушки молодого побегагустоесреднеегустоесреднеегустоеАнтоциановая окраска верхушки молодого побегаслабаяслабаяслабаясредняяслабаяЩетинистое опушение жилок нижней стороны листаредкоесреднеередкоесреднеередкоеФорма листапяти угольнаяокруглаяокруглаядельтовиднаяпятиуголь-наяГлубина верхних боковых вырезок листаглубокиеочень глубокиеочень глубокиесредниеглубокиеСтепень открытости черешковой выемки листазакрытыезакрытыезакрытыеоткрытыеоткрытыеФорма зубчиков листапрямо-выпуклыепрямо-выпуклыепрямо-выпуклыевыпуклыевыпуклыеПаутинистое опушение нижней стороны листасреднеесреднеесреднеегустоегустоеТип цветка-*-женскийженскиймужскойОкраска ягоды (без налета)--чернаячерная-Антоциановая окраска мякоти ягоды--средняяслабая-*нет данных.Исследуемые растения дикорастущего винограда двудомные. Найдены экземпляры с женскими (Ш3, Ш4) и мужскими цветками (Ш5) (рис. 1, 2).  а) Рисунок 1 – Цветки различного типа в урочище Широкая щель заповедника «Утриш» (2021 г.): а) женский тип цветка в популяции №3 (Ш3); б) мужской тип цветка в популяции №5 (Ш5). Опираясь на методику [15], степень открытости коронки молодого побега у растений урочища Широкая щель изменялась от слегка открытой до открытой. Паутинистое опушение – от среднего (3 балла) до густого (4 балла).Обнаруженные и описанные дикорастущие формы винограда Ш1…Ш5 проходили все фазы развития в оба года в полной мере – от распускания почек до созревания винограда. В результате микробиологического анализа были обнаружены единичные сапрофитные бактерии. Колоний грибов и бактерий, схожих по фенотипу с патогенными, не обнаружено. Образцы Ш1, Ш2, Ш3, Ш5 свободны от 7 экономически значимых вирусных патогенов винограда (табл. 2). По результатам исследований только в образце Ш4 присутствовал вирус GPGV (триховирус Grapevine Pinot gris virus). Таблица 2 – Результаты детекции в образцах дикорастущих форм винограда Название образцаПЦР на 18SGPGVGFkVGLRaV-1GLRaV-2GLRaV-3GVAGFLVШ1+-------Ш2+-------Ш3+-------Ш4++------Ш5+------- Выводы. В среднем за два года среди растений винограда урочища Широкая щель сильно изменчивыми были такие признаки, как форма листа и паутинистое опушение нижней стороны листа, форма верхушки молодого побега, степень антоциановой окраски и опушение коронки побега и др. Выявлены дикорастущие формы винограда (Ш1, Ш2, Ш3, Ш5), свободные от 7 экономически важных вирусных патогенов винограда (GPGV, GFkV, GLRaV-1, GLRaV-2, GLRaV-3, GVA, GFLV), перспективные для искусственной инокуляции различными патогенами с целью изучения устойчивости к ним и включения в селекционный процесс.