Цель исследования – повышение иммунологического статуса высокопродуктивных коров до и после родов. Для проведения исследований из числа коров, находящихся в первом периоде сухостоя, ис-пользуя принцип пар-аналогов, было сформировано 4 группы по 10 голов в каждой (контрольная, опыт-ная-1, опытная-2, опытная-3). Коровам контрольной группы иммуномодулирующее средство не инъеци-ровали, коровам опытных групп за 25-30 дней до родов внутримышечно вводили иммуномодулирующее средство трехкратно с интервалом в 7 дней и однократно через 8-12 часов после отела. Иммуномоду-лирующее средство вводили коровам опытных групп в дозах: опытная-1 – 4,0 мл; опытная-2 – 6,0 мл; опытная-3 – 8,0 мл. Условия кормления и содержания животных исследуемых групп одинаковые. Уста-новлено, что введение иммуномодулирующего средства в дозе 6,0 мл внутримышечно трехкратно с ин-тервалом в 7 дней за 25-30 дней до родов и однократно через 8-12 часов после родов способствует сни-жению количества палочкоядерных нейтрофилов с 3,2 до 1,6%, юных нейтрофилов – с 1,4 до 0,6%, лимфоцитов – с 56,0 до 53,6% и увеличению сегментоядерных нейтрофилов с 30,08 до 35,20%, моноцитов – с 2,8 до 4,8%. Показатели естественной резистентности организма коров, которым вводили иммуно-модулирующее средство в дозе 6,0 мл, имели большие градиенты по сравнению с показателями животных контрольной группы: по фагоцитарной активности нейтрофилов – на 4,67%, по бактерицидной активности – на 5,95%, по лизоцимной активности – на 3,41% (за 5 дней до родов). Использование иммуномодулирующего средства в дозе 6,0 мл обеспечивает повышение показателей защитного механизма коров перед родами и после родов.
The aim of the study is increasing the immunological status of highly productive cows before and after calving. To conduct research, 4 groups of 10 heads each were formed from the number of cows that were in the first period of dry standing, using the principle of analogue pairs (control, experienced-1, experienced-2 and experienced-3). Cows of the control group were not injected with an immunomodulatory agent, the experimental groups were intra-muscularly injected 25-30 days before calving with an immunomodulator three times at intervals of 7 days and once 8-12 hours after calving. The immunomodulating agent was administered to cows of the experimental groups in the following dose: experimental-1 – 4.0 ml; experimental-2 – 6.0 ml; experimental-3 – 8.0 ml. The conditions for feed-ing and keeping animals of the studied groups were the same. It was found that the introduction of an immunomod-ulatory agent in a dose of 6.0 ml intramuscularly three times with an interval of 7 days 25-30 days before calving and once 8-12 hours after reduces the number of rod-nuclear neutrophils from 3.2 to 1.6%, young neutrophils-from 1.4 to 0.6%, lymphocytes – from 56.0 to 53.6% and increases segmentonuclear neutrophils from 30.08 to 35.20%, monocytes – from 2.8 to 4.8%. Indicators of natural resistance of cows that were injected with an immunomodulat-ing agent at a dose of 6.0 ml had larger gradients compared to the ones of animals in the control groups: in regard to phagocytic activity of neutrophils – by 4.67%, for bactericidal – by 5.95%, for lysozyme – by 3.41% (5 days be-fore calving). The use of an immunomodulatory agent in a dose of 6.0 ml increases the performance of the protec-tive ability of cows before and after calving.
В настоящее время при промышленном ведении молочного животноводства одним из основных факторов, сдерживающих его эффективность, является снижение репродуктивной функции коров [1, 10, 11, 12]. За последние годы достигнуты значительные успехи в области изучения и внедрения новых методов профилактики послеродовых заболеваний у животных. Однако дальнейший поиск эффективных средств предупреждения нарушения морфофункционального, иммунологического статуса и функции размножения у высокопродуктивных коров остается весьма актуальным [2, 3, 4, 5, 6]. Ряд исследователей считают, что для профилактики послеродовых осложнений коров наиболее надежным и физиологически оправданным является применение различных иммуномодуляторов, среди которых особый интерес представляют тканевые и органические иммуномодуляторы [8, 9]. Применение иммуномодуляторов основано на использовании существующей в организме универсальной системы биорегуляции метаболизма, защитного механизма организма, посредством взаимодействия клеток иммунной, нервной и эндокринной систем [7, 9]. В связи с чем изучение влияния разных доз органического иммуномодулирующего средства на показатели структуры крови, естественной резистентности организма высокопродуктивных коров до и после родов актуально. Цель исследований – повышение иммунологического статуса высокопродуктивных коров до и после родов. Задачи исследований – изучить морфологический состав крови (лейкоформула) коров исследуемых групп до и после родов; определить влияние разных доз иммуномодулирующего средства на морфологический состав крови и на показатели естественной резистентности организма коров.Материалы и методы исследований. Исследования проводились на коровах голштинской породы в условиях ГУП СО «Купинское» Самарской области. После перевода коров в сухостойный период с учетом их молочной продуктивности (более 8000 кг), лактации, живой массы, линейной принадлежности было сформировано 4 группы по 10 голов в каждой (контрольная, опытная-1, опытная-2, опытная-3). Для определения влияния иммуномодулятора органического происхождения на показатели крови и естественную резистентность организма коров использовали иммуномодулирующее средство (В. Н. Ласкавый, В. В. Рыбин, патент РФ №2077882 А61К31115) [7]. Иммуномодулирующее средство (бесцветная жидкость без запаха) – препарат, содержащий в виде активного начала формальдегид – 0,07-0,24%, натрий хлор – 0,90-0,95%, дистиллированную воду. Препарат обладает способностью усиливать функцию стволовых клеток костного мозга и стимулировать жизненно важные функции организма за счет воздействия на клеточный иммунитет, кроветворение, обменные энергетические процессы. Иммуномодулирующее средство вводили коровам опытных групп за 25-30 дней до родов внутримышечно с интервалом в 7 дней трехкратно и через 8-12 часов после родов однократно (опытная-1 – 4,0 мл; опытная-2 – 6,0 мл; опытная-3 –8,0 мл). Животным контрольной группы иммуномодулирующее средство не инъецировали.В процессе исследований за 25-30 дней до родов, за 5 дней до родов и через 5 дней после отела у 5 коров из каждой группы брали кровь из хвостовой вены, используя систему «Моновет», в одно и то же время суток (за 2 часа до кормления) в два контейнера: первый контейнер (содержал гепарин) – для проведения морфологических исследований; второй контейнер – для проведения исследования сыворотки крови (показатели естественной резистентности).Морфологический состав крови изучали подготовкой мазков, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Подсчет форменных элементов крови проводили методом цифровой микроскопии поВ. А. Дубровскому. Фагоцитарную активность нейтрофилов крови устанавливали по методуА. И. Иванова и Б. А. Чухворина. В качестве тест-культуры использовали E. Colli O111, выращенную в течение суток на мясопептонном агаре (МПА). Бактерицидную активность сыворотки крови определяли по методу О. В. Бухарина, В. Л. Созыкина с использованием тест-культуры O111. Лизоцимную активность устанавливали по О. В. Бухарину с применением суточной культуры Micrococcus Luteus (штамм 2655 ГКИ им. Л.А. Тарасевича). Цифровой материал проведенных исследований был обработан методом биометрической вариационной статистики по определению степени достоверности разницы сравниваемых показателей с использованием критерия Стьюдента, принятом в биологии и зоотехнии, с применением программного комплекса Microsoft Excel 10. Степень достоверности отражена соответствующими значениями: Р<0,05 *; P<0,01 **; Р<0,001 ***. Результаты исследований. Изучением морфологической структуры крови (лейкограмма) и показателей естественной резистентности организма коров (фагоцитарная активность нейтрофилов, бактерицидная активность, лизоцимная активность) установлено, что их градиенты зависят от физиологического состояния коров (до родов и после родов), а также от дозы введения внутримышечно иммуномодулирующего средства (табл. 1, 2, 3).Таблица 1Морфологический состав крови коров исследуемых группФорменные элементы крови, %За 25-30 днейдо отелаЗа 5 дней до отелаГруппа животныхконтрольнаяопытная-1опытная-2опытная-3Базофилы1,90±0,081,80±0,061,60±0,071,20±0,051,60±0,05Эозинофилы4,25±0,094,00±0,083,80±0,063,00±0,013,60±0,03Нейтрофилы: юные2,4±0,131,40±0,061,20±0,070,60±0,040,80±0,03палочкоядерные4,28±0,183,20±0,103,00±0,011,00±0,051,40±0,06сегментоядерные31,8±0,7230,20±0,8031,00±0,6435,20±0,5233,60±0,48Лимфоциты48,65±0,8456,00±0,8256,20±0,7653,60±0,6354,60±0,26Моноциты2,95±0,072,80±0,063,20±0054,80±0,054,40±0,06 Таблица 2Морфологические показатели крови через 5 дней после отелаФорменные элементы крови, %Группы животныхконтрольнаяопытная-1опытная-2опытная-3Базофилы1,40±0,661,60±0,041,20±0,051,20±0,05Эозинофилы5,00±0,044,60±0,643,20±0,063,40±0,04Нейтрофилы: юные2,00±0,021,60±0,030,80±0,040,80±0,05палочкоядерные4,20±0,063,80±0,082,20±0,062,40±0,04сегментоядерные28,40±0,7229,60±0,6934,20±0,5834,40±0,55Лимфоциты56,60±1,8056,20±1,9654,00±1,0853,60±1,14Моноциты2,40±0,042,60±0,064,40±0,064,20±0,04 Количество базофилов за 25-30 дней до родов (до введения иммуномодулирующего средства) составляло 1,90±0,08%. После трехкратного введения иммуномодулирующего средствасогласно методике исследований за 5 дней до родов в крови коров опытных групп: первой – 1,60±0,06%; второй – 1,20±0,05%; третьей – 1,60±0,05%; в крови коров контрольной группы – 1,80±0,06%, что на 0,2; 0,6; 0,4%, соответственно, больше, чем в крови коров опытных групп. Таблица 3 Показатели естественной резистентности организма коров исследуемых группГруппа животныхПоказательфагоцитарная активность нейтрофилов, %бактерициднаяактивность, %лизоцимнаяактивность, %До введения препарата за 25-30 дней до отелаВсе группы животных53,30±0,0850,40±0,2115,41±0,19За 5 дней до родовконтрольная64,05±0,3558,18±0,1816,43±0,14опытная-166,25±0,28**55,04±0,1917,69±0,17опытная-268,72±0,21**59,13±0,14*19,83±0,13**опытная-369,01±0,31**59,06±0,20*18,87±0,18*Через 5 дней после отела контрольная62,24±0,2552,23±0,2915,38±0,24опытная-165,05±0,31*53,48±0,3116,34±0,30опытная-268,14±0,36**58,62±0,25**19,66±0,28**опытная-368,20±0,41**58,47±0,30**19,70±0,33** Содержание эозинофилов в крови коров за 25-30 дней до родов составило 4,25±0,09%, что больше, чем за 5 дней до отела, по сравнению с показателем контрольной группы на 0,25%, по сравнению с показателем опытных групп: первой – на 0,45%, второй – на 1,25%; третьей – на 0,65%.В крови коров, которым не вводили иммуномодулирующее средство (коровы контрольной группы), за 5 дней до отела наблюдалось повышенной содержание палочкоядерных и юных нейтрофилов, что указывает на напряженное состояние иммунной системы, оно подтверждается низким содержанием сегментоядерных нейтрофилов. Содержание сегментоядерных нейтрофилов в крови животных контрольной группы, по сравнению с показателем первой опытной группы, меньше на 0,20%, второй опытной группы – на 4,40%, третьей – 2,80%. Количество моноцитов в крови коров контрольной группы снизилось до 2,80%, количество лимфоцитов увеличилось на 7,35%. На 5 день после отела показатели морфологического состава крови у животных опытных групп (содержание форменных элементов), характеризующие иммунный статус коров, превосходят таковые контрольной группы. Так, количество сегментоядерных нейтрофилов в крови животных второй и третьей опытных групп на 5,8, 5,6%, моноцитов – на 2,0 и 1,8%, соответственно, больше, чем в крови коров контрольной группы. В контрольной группе показатели естественной резистентности организма коров за25-30 дней до родов составили: фагоцитарная активность – 53,30±0,28%; бактерицидная активность – 50,40±0,21; лизоцимная активность – 15,41±0,39%. У животных контрольной группы за 5 дней до родов произошло увеличение фагоцитарной активности нейтрофилов на 11,02%; бактерицидной активности – на 2,78%; лизоцимной активности – на 1,08%, что указывает на влияние беременности на показатели естественной резистентности организма перед родами. Активизация показателей иммунной защиты организма коров зависит от дозы введенного иммуномодулирующего средства. Градиента фагоцитарной активности нейтрофилов за 5 дней до родов в крови коров контрольной группы на 2,20% меньше, чем в крови коров первой опытной группы и на 4,67, 4,96% меньше, чем в крови коров второй и третьей опытных групп, соответственно. Фагоцитарная активность нейтрофилов после родов снижается у коров всех исследуемых групп. Наибольшее снижение на 5 день после отела отмечено у животных контрольной группы и составило 62,24±0,25%, что на 1,81% меньше, чем за 5 дней до родов. У животных опытных групп показатель естественной резистентности составил: первой опытной группы – 65,05±0,31%; второй опытной группы – 68,14±0,36%; третьей опытной группы – 68,20±0,41%. Бактерицидная активность сыворотки крови за 5 дней до родов у коров опытных групп больше, чем у коров контрольной (53,18±0,18%): первой – на 1,86, второй – на 5,95; третьей – на 5,88%. Показатель бактерицидной активности сыворотки крови также имеет тенденцию снижения после родов у коров всех исследуемых групп, но у животных опытных групп данная градиента больше, чем в контрольной группе: первой опытной группы – на 1,25%; второй опытной группы – на 6,39%; третьей опытной группы – на 6,24% (разница значимо достоверна (Р<0,01) между контролем и второй, третьей опытными группами). Лизоцимная активность за 25-30 дней до родов составила 15,41±0,19%, что меньше, чем в контроле, за 5 дней до родов на 1,08%. После введения коровам опытных групп согласно методике исследований иммуномодулирующего средства показатели лизоцимной активности сыворотки крови за 5 дней до родов достоверно значимо увеличились у коров второй и третьей групп – на 3,41% (Р<0,01) и на 2,42% (Р<0,05), соответственно. Показатель лизоцимной активности сыворотки крови на 5 день после отела составил в третьей опытной группе 19,70±0,33%, что на 0,04% больше, чем во второй опытной группе (Р>0,05) (разница не достоверна). Лизоцимная активность сыворотки крови в контрольной группе меньше, чем в первой, на 0,96% (Р>0,05), чем во второй – на 4,28%; чем в третьей – на 4,32% (разница значимо достоверна, Р<0,01). Снижение иммунологического статуса коров перед родами свидетельствует о нарушении обмена веществ, что по мнению А. В. Воробьева [2] и В. Ф. Дегай [5] является основной этиологией послеродовых осложнений. Заключение. Иммуномодулирующее средство в дозе 6,0 мл внутримышечно за 25-30 дней до родов трехкратно с интервалом в 7 дней и однократно после отела через 8-12 часов способствует снижению за 5 дней до родов палочкоядерных нейтрофилов от 3,2 до 1,6%, юных нейтрофилов – от 1,4 до 0,6%, лимфоцитов – от 56,0 до 53,6% и увеличению сегментоядерных нейтрофилов – от 30,8 до 35,2%, моноцитов – от 2,8 до 4,8%. Показатели естественной резистентности организма коров второй опытной группы за 5 дней до родов имели большую величину по сравнению с этими показателями организма коров контрольной группы: по фагоцитарной активности нейтрофилов на 4,67%, по бактерицидной активности – на 5,95%, по лизоцимной активности – на 3,41%. После отела показатели морфологического состава крови и естественной резистентности организма коров, характеризующие их иммунологический статус по содержанию сегментоядерных нейтрофилов, моноцитов, градиент естественной резистентности организма, были достоверно больше у коров, которым вводили иммуномодулирующее средство в дозе 6,0 мл, по сравнению с этими показателями организма коров контрольной группы. Между группами животных, которым вводили иммуномодулирующее средство в дозе 6,0 и 8,0 мл, достоверной разницы не отмечено. Использование иммуномодулирующего средства в дозе 6,0 мл внутримышечно трехкратно с интервалом в 7 дней за 25-30 дней до родов и однократно через 8-12 часов после родов обеспечивает повышение показателей иммунологического статуса организма коров перед родами и в послеродовой период.