Russian Journal of Parasitology Russian Journal of Parasitology Российский паразитологический журнал 1998-8435 14282 10.12737/23082 ФАРМАКОЛОГИЯ, ТОКСИКОЛОГИЯ PHARMACOLOGY, TOXICOLOGY ФАРМАКОЛОГИЯ, ТОКСИКОЛОГИЯ Determination of fenbendazole and its metabolites in milk by the method of liquid chromatography coupled with tandem mass-spectrometry Определение фенбендазола и его метаболитов в молоке коров методом жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием Кошеваров Н. И. Koshevarov N. И. Абрамов С. В. Abramov S. В. Абрамова Е. В. Abramova E. В. Мисюра Н. С. Misyura N. С. Абрамов В. Е. Abramov V. Е. Варламова А. И. Varlamova A. И. Кочетков П. П. Kochetkov P. П. Архипов И. А. Arkhipov I. А. arkhipov@vniigis.ru 25 01 2017 25 01 2017 3 4 554 562 https://naukaru.ru/en/nauka/article/14282/view

Цель исследования — разработка методики определения фенбендазола и его метаболитов в молоке коров методом жидкостной хроматографии высокого давления с последующим масс-спектрометрическим детектированием. Материалы и методы. Фенбендазол назначали 5 коровам в дозе 4,8 мг/кг перорально. Пробы молока отбирали через 1, 3, 5 и 10 суток после введения препарата. Методика работы включает описание реактивов, посуды и оборудования, масс-спектрометрические условия анализа фенбендазола и его производных, подготовку оборудования к работе, приготовление раствора элюента, подготовку хроматографа к анализу, определение хроматографических параметров стандартных образцов препарата, подготовку проб молока к анализу, определение параметров хроматографирования экстрактов, процедуру калибровки фенбендазола и метаболитов в элюенте. Результаты и обсуждение. При изучении фармакокинетики фенбендазола и его метаболитов (сульфона и сульфоксида) в молоке кров установлено, что максимальные концентрации обнаружены через 24 ч после введения препарата и составили 22,6 нг/мл для фенбендазол сульфона, 34,0 нг/мл для фенбендазол сульфоксида и 19,7 нг/мл для фенбендазола. Спустя 10 суток после введения препарата содержание фенбендазола и его метаболитов в молоке коров не превышало максимально допустимых значений.

Objective of research: Development of methods for the determination of fenbendazole and its metabolites in milk by liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry. Materials and methods: Fenbendazole was administered orally to five cows. Samples of milk were taken on 1, 3, 5 and 10 days of drug application. The research method includes a description of reagents, plates and equipment; mass-spectrometric conditions for analysis of fenbendazole and its metabolites; preparation of the equipment to operation; preparation of eluent solution; preparation of the chromatograph to analysis; determination of chromatographic parameters of standard drug samples; preparation of milk samples to analysis; establishment of parameters of extracts’ chromatography; procedure of calibration of fenbendazole and its metabolites in eluent. Results and discussion: When studying the pharmacokinetics of fenbendazole and its metabolites (sulfone and sulfoxide) in milk, it was found that the maximal concentrations were determined 24 h after drug administration and were 22,6 ng/ml for fenbendazole sulfone, 34,0 ng/ml for fenbendazole sulfoxide and 19,7 ng/ml for fenbendazole. 10 days after treatment, the concentrations of fenbendazole and its metabolites in milk did not exceed permitted values.

 молоко фенбендазол метаболиты сульфоксид сульфон фармакокинетика жидкостная хроматография масс-спектрометрия. milk fenbendazole metabolite sulfoxide sulfone pharmacokinetics liquid chromatography mass-spectrometry.

ВведениеВигисокс — комплексный антигельминтный препарат с содержанием 8% фенбендазола, 72% никлозамида и вспомогательных веществ. Фенбендазол, входящий в состав препарата, обладает выраженным нематодоцидным и в меньшей степени цестодоцидным и трематодоцидным действиями. Механизм действия его заключается в угнетении фумарат редуктазы, нарушении проницаемости клеточных мембран и нервно-мышечной иннервации, что приводит к гибели гельминта [14, 15]. Установлена высокая эффективность препарата при мониезиозе, диктиокаулезе, стронгилятозах пищеварительного тракта овец, коз и крупного рогатого скота в дозе 60 мг/кг, при трихоцефалезе — 80 мг/кг [1–3].Для внедрения препарата в ветеринарную практику необходимы сведения по параметрам фармакокинетики и остаточным количествам его действующих веществ в органах и тканях животных, что и явилось целью наших исследований. В связи с тем, что после всасывания фенбендазол быстро метаболизируется в печени до сульфоксида (оксфендазола), обладающего антигельминтным действием, и в дальнейшем до сульфона, то их остаточные количества требуют детекции [8].

Архипов И.А., Радионов А.В., Белова Е.Е., Садов К.М., Архипова А.И. Антигельминтная эффективность вигисокса при гельминтозах овец // Рос. паразитол. журнал. - 2010. - № 4. - С. 89-93. Arkhipov I.A., Radionov A.V., Belova E.E., Sadov K.M., Arhipova A.I. Anthelmintic efficacy of vigisox at helminthiasis in sheep. Ros. parazitol. zhurnal [Russian Journal of Parasitology], 2010, no. 4, pp. 89-93. Архипов И.А., Варламова А.В., Данилевская Н.В., Белова Е.Е., Садов К.И. Эффективность вигисокса при гельминтозах молодняка крупного рогатого скота // Рос. паразитол. журнал. - 2011. - № 4. - С. 126-129. Arkhipov I.A., Varlamova A.V., Danilevskaya N.V., Belova E.E., Sadov K.I. Efficacy of vigisox at helminthiasis in young cattle. Ros. parazitol. zhurnal [Russian Journal of Parasitology], 2011, no. 4, pp. 126-129. Архипов И.А., Варламова А.И., Данилевская Н. В. Методика по применению вигисокса при гельминтозах жвачных животных // Рос. паразитол. журнал. - 2013. - № 2. - С. 112-113. Arkhipov I.A., Varlamova A.I., Danilevskaya N. V. Methods for the use of vigisox at helminthiasis in ruminants. Ros. parazitol. Zhurnal [Russian Journal of Parasitology], 2013, no. 2, pp. 112-113. ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Carroll R.J., Ruppert D. Transformation and Weighting in Regression, Chapman and Hall, New York. 1988. Эпштейн Н.А. Оценка пригодности (валидация) ВЭЖХ методик в фармацевтическом анализе (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. - 2004. - Т. 38, № 4. - С. 48-56. Chiap P., Boulanger B., Dewe W. et al. An Analysis of the SFSTP guide on Validation of Chromatographic bioanalytical Methods: Progress and Limitations. J. Pharm. Biomed. Anal., 2003, vol. 32, pp. 753-765. Carroll R.J., Ruppert D. Transformation and Weighting in Regression, Chapman and Hall, New York. - 1988. Committee for medicinal products for veterinary use. Fenbendazole (extrapolation to all ruminants). EMEA/MRL/866/03-FINAL/June 2004. Chiap P., Boulanger B., Dewe W. et al. An Analysis of the SFSTP guide on Validation of Chromatographic bioanalytical Methods: Progress and Limitations. J. Pharm. Biomed. Anal., 2003, Vol. 32, pp. 753-765. Epshtein N.A. Validation of HPLC techniques in pharmaceutical analysis (review). Khimikofarmatsevticheskiy zhurnal [Pharmaceutical Chemistry Journal], 2004, vol. 38, no. 4, pp. 48-56. Committee for medicinal products for veterinary use. Fenbendazole (extrapolation to all ruminants). EMEA/MRL/866/03-FINAL/June 2004. Ermer J., Miller J. H. McB. Method Validation in Pharmaceutical Analysis. 2006, John Wiley & Sons, p. 418. Ermer J., Miller J. H. McB. Method Validation in Pharmaceutical Analysis / John Wiley & Sons, 2006, P. 418. GOST R ISO 5725-6-2002 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results. Хамиде Др., Сеньюва З., Гилберт Дж. Простое руководство для пользователей по разработке и валидации методов / Пер. под ред. А. Галкин. - М: «ООО Ториус 77», 2011. - 43 с. Hartmann C., Smeyers-Verbeke J., Massart D. L., McDowall R. D. Validation on bioanalytical chromatographic methods. J. Pharm. Biomed. Anal., 1998, vol. 17, pp. 193-218. Hartmann C., Smeyers-Verbeke J., Massart D. L., McDowall R. D. Validation on bioanalytical chromatographic methods. J. Pharm. Biomed. Anal., 1998, Vol. 17, pp. 193-218. Khamide Dr., Sen´yuva Z., Gilbert Dzh. Prostoe rukovodstvo dlya pol´zovateley po razrabotke i validatsii metodov. Moscow «OOO Torius 77» Publ., 2011. 43 p.12. Marriner S.E., Bogan J.A. Pharmacokinetics of fenbendazole in sheep. Am. J. Vet. Res. - 1981, мol. 42, No 7, pp. 1146-1148. Marriner S.E., Bogan J.A. Pharmacokinetics of fenbendazole in sheep. Am. J. Vet. Res. - 1981, Vol. 42, No 7, pp. 1146-1148. Prichard E., Barwick V. Quality assurance in analytical chemistry. Spb., Publ. «Professiya», 2011. 320 p. (Russ. ed.: Kontrol’ kachestva v analiticheskoj himii) Причард Э., Барвик В. Контроль качества в аналитической химии / Пер. с англ. под. ред. И. В. Болдырёва. - СПб: «Профессия», 2011. - 320 с. Rew R.S., Fetterer R.H. Mode of action of Antinematodal Drugs. Chemotherapy of parasitic diseases, 1986, pp. 321-334. Rew R.S., Fetterer R.H. Mode of action of Antinematodal Drugs. In «Chemotherapy of parasitic diseases» Ed. W. C. Campbell, R. S. Rew, 1986, pp. 321-334. Senyuva H.Z., Gilbert J. A simple users’ guide to methods of development and validation. (Russ. ed.: Prostoe rukovodstvo dlya pol’zovateley po razrabotke i validatsii metodov). M., Torius 77 Ltd., 2011. 43 p. Van den Bossche H. Chemotherapy of parasitic infections. Nature (London), 1978, Vol. 273, P. 626-630. Van den Bossche H. Chemotherapy of parasitic infections. Nature (London), 1978, vol. 273, pp. 626-630. US Food and Drug Administration. Guidance for industry: Q2B validation of analytical procedures: methodology. Rockville, MD. 1996. US Food and Drug Administration. Guidance for industry: Q2B validation of analytical procedures: methodology. Rockville, MD. 1996.