Acta biomedica scientifica Acta biomedica scientifica Acta biomedica scientifica 2541-9420 2587-9596 12555 10.12737/20616 Экспериментальные исследования в биологии и медицине Experimental Study in biology and medicine Экспериментальные исследования в биологии и медицине ZYMOGRAPHIC ANALYSIS OF LIPOLYTICAL ENZYMES OF SUBCELLULAR VIBRIO CHOLERAE FRACTIONS OF O1 AND O139 SEROGROUPS ЗИМОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЛИПОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ СУБКЛЕТОЧНЫХ ФРАКЦИЙ VIBRIO СHOLERAE O1 И О139 СЕРОГРУПП Марков Евгений Юрьевич Markov Evgeniy Юрьевич Николаев Валерий Борисович Nikolaev Valeriy Борисович Козлов Станислав Николаевич Kozlov Stanislav Николаевич ejimei@mail.ru Урбанович Людмила Яковлевна Urbanovich Lyudmila Яковлевна Миткеева Светлана Карловна Mitkeeva Svetlana Карловна 29 04 2016 29 04 2016 1 2 55 59 https://naukaru.ru/en/nauka/article/12555/view

С помощью электрофореза и тестов радиальной энзимодиффузии с использованием различных поверхностно- активных неионных детергентов в качестве субстратов, импрегнированных в полиакриламидный и агарозный гель, и зучены спектр и активность липолитических ферментов субклеточных фракций холерных вибрионов O1 и O139 серогрупп. В составе и активности липолитических ферментов выявлены межштаммовые различия. Зимографические методы представляют собой удобный, наглядный и простой инструмент, пригодный для сравнительного изучения состава и свойств бактериальных гидролаз.

Zymographic analysis showed that all subcellular fractions of the serogroups possessed different degree of lipolytical activity. Maximal hydrolysis in the radial enzyme-diffusion reaction in agarose gel was observed in Tween-20, Tween-80, Triton Х-305 and Triton Х- 405. Total hydrolase activity of urea extracts in Tween-20, Tween-80, Triton Х- 405, Span-85 excelled those in the preparations of outer membranes. Maximal lipolytical activity in regard to the Tweens was shown by the preparations of urea extracts prepared from the nontoxigenic strains of O1 serogroups, while in relation to the Tritons – preparations of urea extracts from the toxigenic strains (p < 0,05).

 зимографический анализ субклеточные фракции липолитические ферменты Vibrio cholerae субстратный электрофорез zymographic analysis subcellular fraction lipolytical enzyme Vibrio cholerae substrate electrophoresis

Адамов А.К. Перспективы совершенствования холерных вакцин // Эпидемиология, эпизоотология и профилактика особо опасных инфекций. - Саратов, 1986. - С. 75-84. Adamov AK (1986). Perspectives of cholera vaccine improvement [Perspektivy sovershenstvovaniya kholernykh vaktsin]. Epidemiologiya, epizootologiya i profilaktika osobo opasnykh infektsiy, 75-84. Дуванова О.В., Шиманюк Н.Я., Мишанькин Б.Н. Способность расщеплять твин 20 как дифференциальный тест для вибрионов O139 серовара различного происхождения // Клин. лаб. диагн. - 2000. - № 5. - С. 48-49. Duvanova OV, Shimanyuk NY, Mishankin BN (2000). Ability to hydrolyze Tween-20 as a differential test for vibrios of O139 serovar of different origin [Sposobnost’ rasshcheplyat’ tvin 20 kak differentsial’nyy test dlya vibrionov O139 serovara razlichnogo proiskhozhdeniya]. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika, (5), 48-49. Кузьмиченко И.А., Грачёва И.В., Плотников О.П. Деструктивная активность и рост холерного вибриона в присутствии твинов // Пробл. особо опасных инф. - 2001. - Вып. 1, № 81. - С. 101-105. Kuzmichenko IA, Grachyova IV, Plotnikov OP (2001). Destructive activity and growth of Vibrio cholerae in presence of Tweens [Destruktivnaya aktivnost’ i rost kholernogo vibriona v prisutstvii tvinov]. Problemy osobo opasnykh infektsiy, 1 (81), 101-105. Паканещикова Н.В., Силищев Н.Н., Галимзянова Н.Ф., Логинов О.Н. Сравнительное изучение зависимости липолитической активности бактерий рода Serratia от состава питательной среды // Башкирский химическй журнал. - 2006. - Т. 13, № 4. - С. 31-34. Pakaneshchikova NV, Silishchev NN, Galimzyanova NF, Loginov ON (2006). Comparative study of dependence of lipolytical activity of Serratia genus bacteria on the content of nutritional media [Sravnitel’noe izuchenie zavisimosti lipoliticheskoy aktivnosti bakteriy roda Serratia ot sostava pitatel’noy sredy]. Bashkirskiy khimichesky zhurnal, 13 (4), 31-34. Способ дифференциации атоксигенных штаммов холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп от токсигенных по гидролазной активности: Пат. 2375457 Рос. Федерация; C1 C12Q 1/04, 1/30, C12R 1/63 / Агафонова В.В., Телесманич Н.Р., Акулова М.В.; Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт. - № 2008117194; заявл. 29.04.08; опубл. 10.12.09. Бюл. № 34, 8 c. Agafonova VV, Telesmanich NR, Akulova MV (2009). Method of differentiation of atoxigenic Vibrio cholerae strains of O1 and O139 serogroups from toxigenic strains by hydrolase activity: Patent N 2375457 of the Russian Federation [Sposob differentsiatsii atoksigennykh shtammov kholernykh vibrionov O1 i O139 serogrupp ot toksigennykh po gidrolaznoy aktivnosti: Pat. 2375457 Ros. Federatsiya: C1 C12Q 1/04, 1/30, C12R 1/63], (34), 8. Способ определения липолитической активности в субклеточных фракциях бактерий: Пат. 2501014 Рос. Федерация; С1 G01N 33/50, 33/48 / Козлов С.Н., Марков Е.Ю., Николаев В.Б., Урбанович Л.Я., Загоскина Т.Ю., Попова Ю.О.; Иркутский научно-исследовательский противочумный институт. - № 2012132418; заявл. 15.08.12.; опубл. 10.12.13. Бюл. № 34, 8 с. Kozlov SN, Markov EY, Nikolaev VB, Urbanovich LY, Zagoskina TY, Popova YO (2013). Method for determination of lipolytical activity in subcellular fractions of bacteria [Sposob opredeleniya lipoliticheskoy aktivnosti v subkletochnykh fraktsiyakh bakteriy: Pat. 2501014 Ros. Federatsiya; S1 G01N 33/50, 33/48], (34), 8. Телесманич Н.Р. Триацилглицеролипазная активность гемолитических холерных вибрионов // Ж. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 2004. - № 2. - С. 11-14. Telesmanich NR (2004). Triacylglycerol lipase activity of haemolytic Vibrio cholerae [Triatsilglitserolipaznaya aktivnost’ gemoliticheskikh kholernykh vibrionov]. Zh. mikrobiol., epidemiol. i immunobiol., (2), 11-14. Урбанович Л.Я., Марков Е.Ю., Голубинский Е.П., Колесник P.C., Саппо С.Г., Ганин B.C., Каретникова Э.С., Иванова Т.А. Характеристика иммунобиологических свойств антигенного препарата наружных мембран холерного вибриона // Биотехнология. - 1996. - № 6. - С. 27-33. Urbanovich LY, Markov EY, Golubinsky EP, Kolesnik RS, Sappo SG, Ganin VS, Karetnikova ES, Ivanova TA (1996). Characteristic of immunobiological properties of antigenic preparation of Vibrio cholerae outer membranes [Kharakteristika immunobiologicheskikh svoystv antigennogo preparata naruzhnykh membran kholernogo vibriona]. Biotekhnologiya, (6), 27-33. Bornscheuer UT (2002). Microbial carboxyl esterases: classification, properties and application in biocatalysis. FEMS Microbiol. Rev., 26 (1), 73-81. Bornscheuer UT (2002). Microbial carboxyl esterases: classification, properties and application in biocatalysis. FEMS Microbiol. Rev., 26 (1), 73-81. Hosseingholi EZ (2014). In silico analysis of Acinetobacter baumanri phospholipase B as a subunit vaccine candidate. Acta Biotheoretica, 64 (4), 455-475. Hosseingholi EZ (2014). In silico analysis of Acinetobacter baumanri phospholipase B as a subunit vaccine candidate. Acta Biotheoretica, 64 (4), 455-475. Ingole KV, Jalgaonkar SV, Fule RP (1998). Study of proteases and other enzymes of Vibrio cholerae O1 Eltor and O139 serotypes isolated in Yavatmal (Maharashtra). Indian J. Pathol. Microbiol., 41 (4), 419-422. Ingole KV, Jalgaonkar SV, Fule RP (1998). Study of proteases and other enzymes of Vibrio cholerae O1 Eltor and O139 serotypes isolated in Yavatmal (Maharashtra). Indian J. Pathol. Microbiol., 41 (4), 419-422. Jensen RG (1983). Detection and determination of lipase (acylglycerol hydrolase) activity from various sources. Lipids, 18 (9), 650-657. Jensen RG (1983). Detection and determination of lipase (acylglycerol hydrolase) activity from various sources. Lipids, 18 (9), 650-657. Rosenstein R, Gotz F (2000). Staphylococcal lipases: biochemical and molecular characterization. Biochimie, 82, 1005-1014. Rosenstein R, Gotz F (2000). Staphylococcal lipases: biochemical and molecular characterization. Biochimie, 82, 1005-1014. Schuepp C, Kermasha S, Michalski MC, Morin A (1997). Production, partial purification and characterisation of lipases from Pseudomonas fragi CRDA 037. Proc. Biohem., 32 (3), 225-232. Schuepp C, Kermasha S, Michalski MC, Morin A (1997). Production, partial purification and characterisation of lipases from Pseudomonas fragi CRDA 037. Proc. Biohem., 32 (3), 225-232. Stehr F, Kretschmar M, Kroger C, Hube B, Schafer W. (2003). Microbial lipases as virulence factors. J. Mol. Cat. B: Enzym., 22 (5-6), 347-355. Stehr F, Kretschmar M, Kroger C, Hube B, Schafer W. (2003). Microbial lipases as virulence factors. J. Mol. Cat. B: Enzym., 22 (5-6), 347-355. Whayeb SA, Yamamoto K, Castillo MY (1996). Lysophospholipase L2 of Vibrio cholerae O1 affects cholera toxin production. FEMS Immun. Med. Microbiol., 15 (1), 9-15. Whayeb SA, Yamamoto K, Castillo MY (1996). Lysophospholipase L2 of Vibrio cholerae O1 affects cholera toxin production. FEMS Immun. Med. Microbiol., 15 (1), 9-15.